முதலில், துரப்பண பிட்டைத் தேர்ந்தெடுப்பதற்கு முன், துருப்பிடிக்காத எஃகுஎஃகு விளிம்புசெயலாக்கம். சிரமத்தைக் கண்டறிய மிகவும் துல்லியமாகவும், மிக விரைவாகவும் துரப்பணியின் பயன்பாட்டைக் கண்டறிய முடியும். துரப்பண எஃகு விளிம்பு செயலாக்கத்தில் உள்ள சிரமங்கள் என்ன? ஒட்டும் கத்தி: துருப்பிடிக்காத எஃகு செயலாக்க சிப் கடினத்தன்மை, வெட்டும் வெப்பநிலை மிக அதிகமாக உள்ளது. வலுவான சிப் முன் கட்டர் மேற்பரப்பு வழியாக பாயும் போது, ​​அது பிசின், இணைவு வெல்டிங் மற்றும் பிற பிசின் நிகழ்வுகளை ஏற்படுத்தும், இது பதப்படுத்தப்பட்ட பாகங்களின் தோற்ற பிரகாசத்தை பாதிக்கிறது; வேலை கடினப்படுத்துதல் கடுமையானது.

நுகர்வில்பெரிய விளிம்புகள், பாதிக்கும் பல செயல்பாட்டு கூறுகள் உள்ளனபெரிய விளிம்புகள். இங்கே நாம் பல பொதுவான கூறுகளைப் பற்றிப் பேசுகிறோம். முதலாவது அனீலிங் வெப்பநிலை (அனீலிங் வெப்பநிலை என்பது முறையே ப்ரைமர் மற்றும் டெம்ப்ளேட்டின் வெப்பநிலை அளவுரு ஆகும், அப்போது ப்ரைமர் மற்றும் நிரப்பு வரிசையின் 50% இரட்டை இழைகள் கொண்ட டிஎன்ஏ மூலக்கூறுகளின் வெப்பநிலையாகும்.

இது PCR இன் தனித்தன்மையைப் பாதிக்கும் ஒரு முக்கிய காரணியாகும். ஆஸ்பிரேஷன் விஷயத்தில், அனீலிங் வெப்பநிலை இலக்கு வரிசையுடன் ப்ரைமர் செயலிழக்கப்படுவதை உறுதிசெய்யும் அளவுக்கு குறைவாகவும், குறிப்பிடப்படாத பிரிப்புகளைக் குறைக்கும் அளவுக்கு அதிகமாகவும் உள்ளது. நியாயமான அனீலிங் வெப்பநிலை 55℃ முதல் 70℃ வரை இருக்கும். அனீலிங் வெப்பநிலை பொதுவாக ப்ரைமரின் Tm ஐ விட 5℃ குறைவாக அமைக்கப்படுகிறது.